【讨论】甲醛检测 乙酰丙酮有效期 比色皿 分光光度计的检定评价

小鱼625

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甲醛测试问题交流专区+新增CTTC技术研讨会专家意见
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# l/ Z* x, p. E" F* L- E; ^本帖话题：
1、1瓶新购的分析纯试剂AR乙酰丙酮，1瓶3年前购买的AR 乙酰丙酮，和标准浓度甲醛显色读取吸光度值，做曲线。
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   显色后颜色看起来差不多，但吸光度值相差不小，曲线斜率也不一样，AR 乙酰丙酮的有效期多长，对结果有何影响？

* N, c/ S- c: y) U5 ?2、分光光度计的检定：一般实验室是怎么检定的？是用那个标准片，还是用标准试剂核查不同波长的吸光度值？
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* A+ ]- M3 o- t- z/ O3、大家用的分光光度计都是什么型号的（我们用的是723PC）？哪种比较好用？
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4、做甲醛含量时经常出现此下情形。

/ h+ W) `2 t3 Z6 c4 {- W. o- ~现象：

4.1、经常用相同的溶液用同一比色皿测出来的值不一致。
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4.2、同一溶液用2个不同比色皿（型号一致）测出值不一样。

- z2 s" A& H2 i6 g/ G) B4.3、用比色皿测出来的样液吸光度重现性很差。

4.4、清洗时总是有水滴挂在壁上，不论清洗几次都一样。
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+ v7 h3 R7 b  {* l4.5、经常出现样液相对于空白测出是负值。

问题：
4 ^- Y2 ]4 g% Q! R' v" y4 W上述现象出现的主要原因是什么？  怎么样清洗比色皿？  比色皿怎么选择？  清洗效果如何评价？
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fenghua

购买的乙酰丙酮的有效期不大好说清楚，我们的经验是，尽量购买生产日期在一年以内的，而且倒一点点出来看下，不察觉明显浅黄的，基本接近无色的就用了。明显显黄弃之。
5 [% z6 r# E! D+ ~" C/ T0 U不过没有详细测其对空白的吸光度，若测之，并且总结一套数据比较，那就细致了。有没有做过此类研究，对空白蒸馏水的吸光度，在多少以下，对试验无影响或很小的影响？

品质管理

分光光度计的检定主要有波长、杂散光、透射比，均是用对应的滤光片
# w- Z2 [% q% }- j4 B! W规程JJG178

品质管理

哪种分光光度计好用，要考虑性价比了，721...723这些是上海老牌厂家的。我们做甲醛用的是Unico，

野渡孤舟

吸光度值相差不小，曲线斜率也不一样这一现象感觉就算是用同一瓶的乙酰丙酮做也会出现。

小鱼625

野渡孤舟 发表于 2015-1-7 23:34
吸光度值相差不小，曲线斜率也不一样这一现象感觉就算是用同一瓶的乙酰丙酮做也会出现。

# X) _' m/ F, }8 t* k5 @1、可以做一组详细数据表，旧的乙酰丙酮，新的乙酰丙酮，同一瓶乙酰丙酮，三组数据对比表。
2、做一组比色皿效果评价试验：
: e" n) ~# Q0 T     A、常用的比色皿，同一样液用型号相同的一组比色皿测试数据；
     B、清洗后的比色皿（依次用丙酮、乙醇、去离子水清洗），同一样液用型号相同的一组比色皿测试数据；     C、用标准溶液显色，用型号相同的一组比色皿测试数据；
     D、用去离子水试验，用型号相同的一组比色皿测试数据。

小鱼625

品质管理 发表于 2015-1-7 22:21
哪种分光光度计好用，要考虑性价比了，721...723这些是上海老牌厂家的。我们做甲醛用的是Unico，

3 m# {% X* |# J- `, zUnico？是进口的吧？精度如何？重现性如何？

品质管理

算是价廉物美的了，精度和重现性均可。说是美国的牌子，实质在上海产，几千块搞定

品质管理

前后均用同一比色皿，也可减少比色皿带来的差异

caohui

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可见分光光度计是依据物质对可见区辐射（光）产生的特征吸收光谱及朗伯—比尔（Lambert—Beer）定律，测量物质对不同波长单色辐射的吸收程度，进行定量分析的仪器。仪器主要由光源系统、单色器系统、样品室和检测器系统组成。常见主要型号有72、721、722、723等，但其原理是相似的。本文主要以721型分光光度计为例进行阐述。

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1、  波长准确度的检定和调整

仪器波长准确度是指仪器波长指示器所指示的波长值与仪器输出的实际波长值之间的符合程度。波长准确度是仪器最重要的技术指标之一，它直接影响仪器的使用范围及分析数据的准确性。我们主要采用标准干涉滤光片进行波长准确度的检定，我们采用的标准干涉滤光片是经国家计量部门检定合格，其技术性能不低于JJGB812—93“干涉滤光片检定规程”中，用于检定波长的1级干涉滤光片的要求（波长准确度±1nm，带宽＜15nm）。（1）检定方法：首先将仪器波长指示盘转到580nm处，观察在样品室内看到的光斑是否为黄色光斑。若不是则要将调节波长调节螺杆（具体调节方法见下面）使其为黄色再进行检定。然后按照被检仪器的光谱范围选择相隔合理的干涉滤光片，将各滤光片分别垂直放置于样品室内的适当位置，并使入射光通过滤光片的有效孔径内，从同一波长方向逐点测出滤光片的波长—透射比示值，求出相应的峰值波长，连续测量3次，求平均值。其结果应满足检定规程中规定的误差：360至500nm范围内，允许误差±3nm，500nm至600nm范围内，允许误差±5nm，600nm至700nm范围内，允许误差±6nm。如果仍然有超差，可通过调节波长读盘的位置得以合格。（2）波长调节方法：首先将仪器面板上的光亮调节器即100%旋钮按顺时针方向旋转至光亮最强处，把波长盘调节至580nm处，在比色皿暗箱通光孔处放一张白色的卡片纸，调节光源灯垂直对准通光孔，并调节波长调节螺杆使卡片上的单色光色黄、光强、边缘无光晕或杂色。

2、  杂散辐射率（杂散光）的检定和调整

国家对分光光度计的杂散光的要求是有明确规定的，棱镜型分光光度计的杂散光不超过4.0%、3级光栅型分光光度计其杂散光不超过2.0%。我们检定仪器杂散光是采用经计量部门测定合格的“杂散辐射测量滤光片”即（标称）半高波长为470nm的截止型滤光片。（1）检定方法：将仪器波长读盘调节至420nm处，以空气为参比，测量出其透射比示值。（2）调整方法：杂散光是可见分光光度计最重要的指标之一，产生杂散光的主要原因有：灰尘玷污光学元件或光学元件上有水珠例如光源灯、棱镜（光栅）、透镜以及反射镜等；光学元件被损坏或者其它缺陷（如棱镜中有气泡）；光路内存在漏光现象等等。对于光学元件的灰尘和水珠可用镜头纸醮无水酒精进行擦拭，并用电热吹风吹干。对于光学元件的损坏只有进行更换。对于漏光，可用黑布遮住仪器右侧、测试、光电管暗盒等部分，观察电表指示是否有影响，找到漏光处加以排除即可。处理完，再进行杂散光的检定。

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3、  透射比的检定和调整

检定透射比采用透射比标称值分别为10%、20%、30%（或40%）左右的光谱中性滤光片，分别在440、546、635nm波长处，以空气为参比，分别测量各滤光片的透射比。对于棱镜型和3级光栅型可见分光光度计其透射比准确度为±2.5%。影响仪器透射比的原因有：（1）比色槽定位不精密，松动而引起每次移位不一致而重现性差，对于这种现象可以重新校正比色槽定位部件；（2）中性滤光片在比色槽框架内安放的位置不一致有松动移位的可能，可以用定位夹予以固定。（3）聚光透镜上有溶液影响透光。应予以擦拭干净。

caohui

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来源网络
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比色皿的使用注意事项和清洗方法

一、比色皿注意事项

比色皿一般为长方体，其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面采用熔融一体、玻璃粉高温烧结和胶粘合而成。所以使用时应注意以下几点:：

  1、拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面。同时注意轻拿轻放，防止外力对比色皿的影响，产生应力后破损。
2、凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得长期盛放在比色皿中。

3、不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤;。

4、当发现比色皿里面被污染后，应用无水乙醇清洗，及时擦拭干净。

5、不得将比色皿的透光面与硬物或脏物接触。盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附，然后再用镜头纸或丝绸擦拭。

二、比色皿成组性测试

在测量时如对比色皿有怀疑,可自行检测，方法如下：

1、用户可将波长选择置实际使用的波长上,将一套比色皿都注入蒸馏水,将其中一只的透射比调至100%处,测量其他各只的透射比,凡透射比之差不大于0.5%,即可配套使用。

2、比色前将各个比色皿中装入蒸馏水，在比色波长下进行比较，误差在±0.001吸光度以内的比色皿选出4-8个进行比色测定，可避免因比色皿差异造成测量误差。

3、我公司的比色皿，在出厂前检测，原则上是0%误差。

   三、比色皿的洗涤方法

随着光谱分析仪器的迅速发展，微量、半微量、荧光等一些比色皿不断出现，对使用维护、清洗比色皿有更高的要求。一般在国外都是一次性使用，在国内为了节约成本，开源节流而重复使用。如何对比色皿进行清洗，只能按照各种试剂，采用能溶解中和的方法来进行清洗，原则上一是不能损坏比色皿的结构和透光性能；二是能够采用中和溶解的方法来达到比色皿干净如初的效果。而分光光度计中比色皿洁净与否是影响测定准确度的因素之一。因此，必须重视选择正确的洗净方法。下面介绍几种清洗方式：
      1、比如测定溶液是酸，如果不干净，就用弱碱溶液洗，要是测定溶液是碱，如果不干净，就用弱酸溶液洗，要是测定溶液是有机物质，如果不干净，就用有机溶剂，比如酒精等溶液洗。
      2、选择比色皿洗涤液的原则是去污效果好，不损坏比色皿，同时又不影响测定。
0 P9 o% Z% k6 H# b8 g      3、分析常用的铬酸洗液不宜用于洗涤比色皿，这是因为带水的比色皿在该洗液中有时会局部发热，致使比色皿胶接面裂开而损坏。同时经洗液洗涤后的比色皿还很可能残存微量铬，其在紫外区有吸收，因此会影响铬及其他有关元素的测定。一般主张使用硝酸和过氧化氢（5：1）的混合溶液泡洗，然后用水冲洗干净。

4、对一般方法难以洗净的比色皿，还可以采取以下两种方法。
  e8 E' E+ \' k6 W: ^4 K. C       A、先将比色皿侵入含有少量阴离子表面活性剂的碳酸钠（20克/升）溶液泡洗，经水冲洗后，再于过氧化氢和硝酸（5：1）混合溶液中侵泡半小时。
       B、在通风橱中用盐酸、水和甲醇（1：3：4）混合溶液泡洗，一般不超过10分钟。

C、比色皿不可用碱液洗涤，也不能用硬布、毛刷刷洗。

四、以上方法适用于本公司的玻璃粉高温烧结的各类比色皿。

五、黑壁微量石英比色皿，因其材质的不一致，尤其要注意不能放在酒精里浸泡，用完后，可以立即用棉球或擦镜纸沾酒精清洗，晾干，然后存放于干净的容器或盒子中备用。

六、熔融一体比色皿，可以参照玻璃粉高温烧结的比色皿清洗方法，可以长时间浸泡在酒精或酸性溶液，也可以超声波清洗机清洗，操作时应将超声频率调至最低限度，避免频率过高导致比色皿破损。
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比色皿对于在化验室工作的同志们来说很熟悉，比色皿又名吸收池或样品池，用来装参比液、样品液。配套在分析仪器上，对物质进行定量，定性分析。?按使用的波长范围可分为三大系列，即可见光系列（称玻璃比色皿），紫外可见光系列（称石英比色皿），红外光系列（称红外比色皿），我们经常使用的是玻璃比色皿和石英比色皿。

　　在使用时，每次装入参比液或样品液测量后，会将参比液或样品液倒入废液瓶。倒出时人们的习惯做法是：很随意地倒出参比液或样品液，这样参比液或样品液会流到比色皿的光面上，再次装入参比液或样品液后，我们会用滤纸或脱脂棉擦拭比色皿的光面，这样时间久了就会在比色皿的光面上留下划痕，划痕会影响测定值，就必须更换新的比色皿。

　　好的方法是：两手捏住比色皿后，将参比液或样品液沿着比色皿的一个角倒入废液瓶，这时不要着急将比色皿离开废液瓶，而是顺势将比色皿的倒出角贴到废液瓶上，让比色皿里面的液体全部沿着这个角流出，这样，比色皿的光面上几乎不会粘有液体，也就不用再去用滤纸或脱脂棉擦拭，减少擦拭次数，这样就会延长比色皿的使用时间。

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声音

纳氏试剂一般等配置12h达到稳定后才能使用，闭光保存 有效期6周，期间需每周一次校正。

/ k6 x8 s& i7 e6 U至于配置用到的乙酰丙酮（戊二酮），个人觉得使用一年以内的，一瓶也就五十几块吧

声音

比色皿的正确使用和注意事项

在使用比色皿时,两个透光面要完全平行,并垂直置于比色皿架中,以保证在测量时,入射光垂直于透光面,避免光的反射损失,保证光程固定。
7 Q' k) f2 B1 A4 m　　比色皿一般为长方体,其底及两侧为磨毛玻璃,另两面为光学玻璃制成的透光面粘结而成。所以使用时应注意以下几点:
7 l, O6 e/ {6 b' P% F& q1、拿取比色皿时,只能用手指接触两侧的毛玻璃,避免接触光学面。荧光分光光度计上使用的四通比色皿一般可轻拿四角，不得接触任何一面。
! ~4 X( q3 r* y. d0 w2、不得将光学面与硬物或脏物接触。盛装溶液时,高度为比色皿的2/3处即可,光学面如有残液可先用滤纸轻轻吸附,然后再用镜头纸或丝绸擦拭。
: `3 O. ]7 |3 h  c* I7 G- a3、凡含有腐蚀玻璃的物质的溶液,不得盛放在比色皿中。
4、比色皿在使用后,应立即用水冲洗干净。

5、不能将比色皿放在火焰或电炉上进行加热或干燥箱内烘烤;
6、在测量时如对比色皿有怀疑,可自行检测。用户可将波长选择置实际使用的波长上,将一套比色皿都注入蒸馏水,将其中一只的透射比调至95%(数显仪器调置100%)处,测量其他各只的透射比,凡透射比之差不大于0.5%,即可配套使用。
7、比色皿中的液体，应沿毛面倾斜，慢慢倒掉，不要将比色皿翻转，直接口向下放在干净的滤纸上吸干剩余液，然后用蒸馏水冲洗比色皿内部倒掉（操作同上）避免液体外流，使第2次测量时不用擦拭比色皿，不致因擦拭带来的误差。

比色皿的洗涤方法
　　分光光度法中比色皿洁净与否是影响测定准确度的因素之一。因此，必须重视选择正确的洗净方法。
　　选择比色皿洗涤液的原则是去污效果好，不损坏比色皿，同时又不影响测定。
一般而言，使用完毕后用蒸馏水少量多次洗涤。如果测定的溶液是难溶于水的有机物质，可以用有机溶剂洗涤。最常用的是无水乙醇。亦可用乙醚与无水乙醇的混合液，对脂溶性强的物质可先用丙酮洗涤，再用水清洗。

分析常用的铬酸洗液不得用于洗涤比色皿，这是因为带水的比色皿在该洗液中有时会局部发热，致使比色皿胶接面裂开而损坏。同时经洗液洗涤后的比色皿还很可能残存微量铬，其在紫外区有吸收，因此会影响铬及其他有关元素的测定。
　　一般主张使用硝酸和过氧化氢（5：1）的混合溶液泡洗，然后用水冲洗干净。对一般方法难以洗净的比色皿，还可以采取以下两种方法。
$ q/ ?* I5 H* W, R3 h+ @6 Q4 m１、先将比色皿侵入含有少量阴离子表面活性剂的碳酸钠（20克/升）溶液泡洗，经水冲洗后，再于过氧化氢和硝酸（5：1）混合溶液中侵泡半小时。
5 W1 b" u) b1 G/ F7 g; D( Q2、 在通风橱中用盐酸、水和甲醇（1：3：4）混合溶液泡洗。

小鱼625

caohui 发表于 2015-1-9 22:47
来源网络
比色皿的使用注意事项和清洗方法一、比色皿注意事项比色皿一般为长方体，其底及两侧为磨毛玻璃, ...

: J0 Z3 y5 g+ B很详细细致，谢谢分享！

小鱼625

声音 发表于 2015-1-10 08:59
纳氏试剂一般等配置12h达到稳定后才能使用，闭光保存 有效期6周，期间需每周一次校正。

至于配置用到的 ...

2 i& B* y& q7 v( k: ~2 O纳氏试剂配置后需放置过夜，标准上说有效期为4周，实际最多用2周，2周后纳氏试剂本身就会有黄色了，空气氧化和光照原因，所以一般用一周就重新配置了。

小鱼625

声音 发表于 2015-1-10 09:06
) }" i. k& F5 _" b6 n/ q) z6 a( v比色皿的正确使用和注意事项在使用比色皿时,两个透光面要完全平行,并垂直置于比色皿架中,以保证在测量时,入 ...

3 b3 B) Z4 K  w4 V3 B0 T. D% k# P整理的很详细，谢谢分享！

野渡孤舟

小鱼625 发表于 2015-1-11 13:37
纳氏试剂配置后需放置过夜，标准上说有效期为4周，实际最多用2周，2周后纳氏试剂本身就会有黄色了，空气 ...

  Z- S  t+ L9 x5 ~3 u  ?纳氏试剂有效期6周 没说颜色加深后就不能使用了 只是要做校正曲线校正

小鱼625

野渡孤舟 发表于 2015-1-11 22:04
纳氏试剂有效期6周 没说颜色加深后就不能使用了 只是要做校正曲线校正

1、是的，GB/T 2912.1-2009中确实说明乙酰丙酮试剂有效期为6周，使用一段时间后，一个星期左右，本身颜色就会是淡黄的了，当然可以做校正曲线。到了3个星期后的颜色就比较黄了，此时再做校正曲线误差就会增大了吧。
2、CTTC的专家有指出，乙酰丙酮本身无色，可以用检出限附近的标准浓度甲醛溶液与纳氏试剂显色作为参照物，大部分样品（无甲醛）对照显色后可以不上机，这样可以提高工作效率。
3、对于样品量大的，一般一个星期左右就差不多用完了。
  以上是个人看法，欢迎指导！

lingdian

楼上所述的第2条，的确可提高工作效率
专家们这么说，那么试验记录怎么填写，与标准方法偏离吗？

lingdian

纳氏试剂的有效期说是至少可用6周，但每周均需做一次校正
说实话，若校正下来偏差大的，弃之，灵活掌握吧
& d+ f' j  R! p; {% p
( ~/ B: a+ ~. B% T4 {& ?! n总的来说，我们实验室甲醛测试，大多都是20以下，超过75的只有极少数类别的产品